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基因探針?lè)≒CR試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn)6要素
點(diǎn)擊次數(shù):1376 更新時(shí)間:2020-12-02

基因探針?lè)≒CR試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn):

1. 一管式操作,用戶(hù)只需要提供樣品即可。

2. 根據(jù)大豆熱休克蛋白基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物,能專(zhuān)一性檢測(cè)出樣品中的大豆成分,但不能檢測(cè)其他非大豆成分。

3. 快速,整個(gè)檢測(cè)過(guò)程(按一個(gè)樣品計(jì))所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。

4. 只需要普通 PCR 儀和凝膠電泳儀,無(wú)需配置貴重儀器設(shè)備。

5. 對(duì)混合樣品中大豆成分的檢測(cè)下限為 0.1%,對(duì)樣品中大豆成分的核酸檢測(cè)下限為 1.0ng/μL。

6. 本只能用于科研,足夠 50 次 40uL 體系的常規(guī) PCR。

基因探針?lè)≒CR試劑盒五要素:

①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

基因探針?lè)≒CR試劑盒操作步驟: 

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無(wú)水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無(wú)水乙醇。

9.把上述混勻基因探針?lè)≒CR試劑盒的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請(qǐng)分兩次過(guò)柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液; 

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